Determinacion de nitrito/nitrato (Griess)
Determinación de óxido nítrico
La medición de los nitritos totales (NO2-) se basa en la reacción de Griess (cita)
1). Muestra: plasma, orina, líquido cefalorraquídeo, etc. (Previamente desproteinizados): 10, 20 o 50 uL
2). Agua bidestilada o milli-Q: 40, 30 o 0 uL
3). Curva de calibración: NaNO2, 100 uM.: 0, 2, 4, 8, 15, 30 y 50 uL
4). Agua bidestilada (milli Q): 50, 48, 46, 35, 20, y 0 uL
5). Sulfanilamida (Sigma) al 1%: 100 uL
6). Agitar suavamente (en agitador robital)
7). Incubar a 22 oC durante 15 min en oscuridad
8). N-naftilendiamina dihidroclorada (NED, Sigma) 0.1%: 100 uL
9). Agitar suavemente (en agitador orbital)
10). Incubar a 22 oC durante 15 min. en oscuridad
11). Leer la microplaca en un lector de microplacas a 540 nm.
La medición de los nitritos totales (NO2-) se basa en la reacción de Griess (cita)
1). Muestra: plasma, orina, líquido cefalorraquídeo, etc. (Previamente desproteinizados): 10, 20 o 50 uL
2). Agua bidestilada o milli-Q: 40, 30 o 0 uL
3). Curva de calibración: NaNO2, 100 uM.: 0, 2, 4, 8, 15, 30 y 50 uL
4). Agua bidestilada (milli Q): 50, 48, 46, 35, 20, y 0 uL
5). Sulfanilamida (Sigma) al 1%: 100 uL
6). Agitar suavamente (en agitador robital)
7). Incubar a 22 oC durante 15 min en oscuridad
8). N-naftilendiamina dihidroclorada (NED, Sigma) 0.1%: 100 uL
9). Agitar suavemente (en agitador orbital)
10). Incubar a 22 oC durante 15 min. en oscuridad
11). Leer la microplaca en un lector de microplacas a 540 nm.
posted by labtox at 5:44 p.m.
6 Comments:
Estimado Sergi-Z:
En mi experiencia no siempre es necesario reducir los nitratos, aunque hay varios autores que lo recomiendan, ocacionalmente hemos usado granallas de cadmio (activadas con una solucion acidica).
Si, las incubaciones las hago dentro del cajon de mi mesa de trabajo (asi me evito gastar hojas de alumino cada vez que la realizo).
Si desea ver algunos de los resultados con esta tecnica le invito a que visite mi sito de Labotox-Congresos (qe es part d Labtox), ahi encontara algunos de los resumenes de congresos que hemos presentado.
Le invito tambien que vea mi otros dos sitios blog:
http://polycarpio.blogspot.com y
http://ojo-clinico.blogspot.com
Saludos cordiales
JM Gallardo
Estimado sr Gallardo, quisiera saber como puedo saber si existe produccion de nitrato de una forma fácil...Yo estoy usando la difenilamina, pero esta tambien reacciona con los nitritos o no... me gustaria que pudiera aclarar mis dudas... gracias.
Lo felicito Sr Gallardo por compartir con el resto del mundo sus protocolos de laboratorio.
Saludos
Marco Galleguillos
Chile
Hola buenas tardes Doctor! seria posible que me explicara, porque a pesar que las muestras de sangre son lavadas y no ven a simple vista,permanecen en el lugar de los hechos? y 2) el fundamento y procedimiento de la inmunocromatografia ? Gracias
Le agradeceré me informe en que se solubilizan la sulfanilamida y el NED.
Muchas gracias por compartir su protocolo. Un saludo cordial.
Ana Lilia, lo que en realidad se ve es la fluorescencia de la hemoglobina, no la sangre.
Carlos Mendez
La sulfanilamida en acido fosforico al 5% y el NED en agua BD
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