Electroforesis en Gel de Poliacrilamida - SDS

Electroforesis en Gel de Poliacrilamida - SDS
SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE)

Gel separador

El volumen total es de 8 mL (suficiente para dos minigeles de 10 x 8 cm)

Para geles con concentracion de: - 12% - 10% - 8% - 6% -
Mezcla de acrilamida/bisacrilamida - 4.32 mL - 3.6 mL - 2.884 mL - 2.16 mL -
Tris-HCl 1 M pH 8.8 - 3 mL - 3 mL - 3 mL - 3 mL -
Agua BD - 560 uL - 1.28 mL - 1.996 mL - 2.72 mL -
SDS al 10% - 80 uL - 80 uL - 80 uL - 80 uL -
Persulfato de amonio al 10% - 40 uL - 40 uL - 40 uL - 40 uL -
TEMED - 5 uL - 5 uL - 5 uL - 5 uL -

Nota: Una vez vertido el gel es conveniente adicionar unos 500 - 1000 uL de metanol para facilitar la gelificacion "pareja", se debera retirar antes de añadir el gel concentrador.

Gel concentrador

El volumen total es de 4.5 mL (suficiente para dos minigeles)
~4.8% acrilamida/bis
1). 1 mL dezcla de Acrilamida/Bisacrilamida
2). 2.8 mL Agua BD
3). 625 uL Tris-HCl 1 M, pH 6.8
4). 50 uL de SDS al 10%
5). 25 uL de Persulfato de amonio al 10%
6). 5 uL TEMED

Preparacion de las soluciones

Acrilamida-Bisacrilamida (relacion 37:1)

1). 22.2 g acrilamida
2). 0.6 g bis-acrilamida
3). Aforar a 100 ml con agua BD.

Buffer de corrida

1). 57.6 g Glicina
2). 12 g Tris base
3). 4 g SDS
4). Aforar a 4 L con agua BD

Solucion de tincion

1). 2.5 g Azul Brillante Coomassie R-250
2). 450 mL metanol
3). 100 mL acido acetico glacial
4). Aforar a 1 L con agua BD

Solucion destiñidora

1). 300 mL metanol
2). 400 mL acido acetico
3). Aforar a 4 L con agua BD

Buffer de muestra 5X (10 mL)

1). 3.125 mL Tris-HCl 1 M, pH 6.8
2). 1 g de SDS
3). 2.5 mL de glicerol
4). 75 uL de azul de bromofenol al 2% disuelto en etanol puro.
5). 1 uL de 2-mercaptoetanol
6). Aforar a 10 mL con agua BD