Determinacion de la peroxidacion lipidica (MDA)

Malondialdehido (MDA) en plasma y tejidos.

1). 400 uL de plasma o sobrenadante de tejidos
2). 200 uL de un mezcla de reactivos
(8.0% SDS,
1.5 mL acido acetico al 20% (pH 3.5),
1.5 mL de acido tiobarbiturico al 0.8%,
300 uL de butil-hidroxi-tolueno al 4% (w/v) y
300 uL de agua BD)
3). Incubar a 95°C durante 60 min.
4). 1.0 mL agua BD
5). 5.0 mL de n-butanol-piridina (15:1, vol/vol)
6). Mezcar vigorozamente
7). Centrifugar a 2,000 g durante 15 min.
8). Conservar el sobrenadante
9). Leer la absorbancia en un espectrofotometro a 532 nm.
10). Curva de calibracion con MDA bis-dimethyl acetal (Sigma) de 0 a 500 nanomoles MDA
11). Se expresa en nanomoles de MDA por miligram de proteina otal.

La variabilidad intra-ensayo en cinco set (de tres replicados) y el coeficiente de variacion fue del 8.9 ± 2.4%.

Referencia.

Ohkawa, H, Ohishi N, and Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal Biochem 95: 351-358, 1979