Determinacion de fosfato total

Determinacion de fosfato total

1). Pesar 0.5 mg de muestra de tejido (en un tubo Pyrex)
2). 50 uL de nitrato de magnesio al 10%
3). Evaporar hasta secar directamente sobre a llamade un mechero (no muy intensa)
4). Enfriar a temperatura ambiente
5). 300 uL de HCl 1 N
6). Inubar a 100oC, 15 min. (baño maria o seco)
7). 700 uL de Ac. ascorbico / molibdato (1 parte a 6 partes mezcladas justo antes de añadir)
8). Incubar a 45 oC, 20 min.
9). Leer la absorbancia a 820 nm contra el blanco de reactvos (la absorbanbcia cae enter 0.240 for 0.01 µmol fosfato).

Peparacion de la curva de calibracion

0.001 M de fosfato use 100, 200, 300, 400, 500 ul y afore a 500 ul de volumen final con agua BD.

Reactivos

Nitrato de magnesio al 10% disuelto en etanol
HCl 0.1 M
Acido ascorbico al 10% (1 g/10 mL)
Molbdato de amonio 0.42% en acido sulfurico 1 N (0.42 g + 2.66 mL H2SO4 y aforar a 100 mLcon agua BD)

* El acido ascorbico es estable a 2 - 4oC durante aprox. 7 semanas.