Determinación de creatinina

Determinación de creatinina

1]. 5 uL de muestra (plasma desproteinizado, u orina)
2]. 45 uL de agua BD
3]. 50 uL de ácido pícrico 1%
4]. 50 uL de NaOH 10%
5]. Agitar suavemente
6]. Incubar a 22 oC, 3 min.
7]. Leer a 540 nm (también se puede leer a 492, 500, y 510 nm según se disponga de filtros en el lector de microplacas)
8]. La reacción es estable durante unos 30 min, después de ese tiempo se incrementa.

Curva de calibración

Creatinina (1 ug/uL): 0, 2, 4, 8, 15, 30, y 50 uL
Agua BD: 50, 48, 46, 42, 35, 20, y 0 uL
Ácido pícrico (1%): 50 uL a todos los pozos
NaOH (10%): 50 uL a todos los pozos
Volumen de muestra: 5, 10, o 15 uL

Preparacion de los reactivos:

Ácido pícrico 1%
1 g de ácido pícrico (Sigma).
Aforar a 100 mL con agua BD

NaOH 10%
10 g de NaOH (Química Monterrey, Monterrey Mex)
100 mL de HCL al 0.1 N (High Purity, Mexico, D.F)

Estandar de creatinina 1 mg/mL
0.1 g de creatinina (Sigma)
100 mL de HCL 0.1 N