Determinación de la concentración de DNA o RNA

Concentración de DNA por método espectrofotométrico en UV

Determinación de la concentración de DNA o RNA

1]. 495 uL de buffer (Buffer TE 1x) o de buffer para el "blanco"
2]. Leer a 260 y 280 nm UV
3]. 5 uL de muestra (Colocarla con una punta larga de las que se emplean para cargar geles) (Dilución final de 1/100).
4]. Mezclar bien y gentilmente (evitar las burbujas) con la misma pipeta
5]. Leer a 260 nm y 280 nm
6]. Calcular la concentración de ácidos nucleicos A260/A280

El valor de 1 en DO corresponde a aproximadamente:

= 50 ug/mL de DNA para DNA de doble cadena (ds DNA)
= 40 ug/mL de DNA para DNA de una sola cadena o de RNA
= 20 ug/mL para oligonucleotidos


Notas:

Las lecturas a 260 nm sirven para calcular la concentración de ácidos nucleicos

La razón de las lectras a 260 nm y 280 nm [A260/A280] permite estimar el grado de pureza de los ácidos nucleicos

Las preparaciones puras de DNA y RNA darán una razón de entre 1.8 y 2.0.

En el caso de contaminación con proteínas o fenol, l proporción será menor y no se podrá realiza la cuantificación adecuada.

ds DNA OD = 1 = > 50 ug/mL coeficiente de extinción molar = 1/50 = 0.02