Determinación de proteinuria con ácido sulfosalicilico

Determinación de proteínas (proteinuria) con Acido Sulfosalicilico

1]. Muestra: 0.5 mL de orina (lo mas fresca posible)
2]. Colocar 2.5 mL de ácido sulfosalicilico al 3% (Química Monterrey)
3]. Agitar suavemente
4]. Incubar a temperatura ambiente durante 10 min
5]. Evaluar el grado de turbidez con respecto a una muestra que contenga agua destilada.
6]. A mayor turbidez, mayor cantidad de proteinuria. Se puede reportar en +, ++. +++. y ++++
7]. Si el resultado es positivo, repetir el ensayo utilizando procedimientos mas específicos.

Curva de calibración

1). Usar tres o mas calibradores de proteínas diluidas en agua.

• 0 ug/mL,
• 100 ug/mL,
• 250 ug/mL,
• 500 ug/mL,
• 750 ug/mL y
• 1000 ug/mL de BSA (2 mg/mL)

2). Aforar 1 mL (1000 uL) con agua BD o buffer.
Nota: Esta medición se basa en la precipitación de proteínas y es muy reproducible
El acido sulfosalicilico es muy estable a temperatura ambiente (+ de 6 meses)

Determinación de la concentración de DNA o RNA

Concentración de DNA por método espectrofotométrico en UV

Determinación de la concentración de DNA o RNA

1]. 495 uL de buffer (Buffer TE 1x) o de buffer para el "blanco"
2]. Leer a 260 y 280 nm UV
3]. 5 uL de muestra (Colocarla con una punta larga de las que se emplean para cargar geles) (Dilución final de 1/100).
4]. Mezclar bien y gentilmente (evitar las burbujas) con la misma pipeta
5]. Leer a 260 nm y 280 nm
6]. Calcular la concentración de ácidos nucleicos A260/A280

El valor de 1 en DO corresponde a aproximadamente:

= 50 ug/mL de DNA para DNA de doble cadena (ds DNA)
= 40 ug/mL de DNA para DNA de una sola cadena o de RNA
= 20 ug/mL para oligonucleotidos


Notas:

Las lecturas a 260 nm sirven para calcular la concentración de ácidos nucleicos

La razón de las lectras a 260 nm y 280 nm [A260/A280] permite estimar el grado de pureza de los ácidos nucleicos

Las preparaciones puras de DNA y RNA darán una razón de entre 1.8 y 2.0.

En el caso de contaminación con proteínas o fenol, l proporción será menor y no se podrá realiza la cuantificación adecuada.

ds DNA OD = 1 = > 50 ug/mL coeficiente de extinción molar = 1/50 = 0.02